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Production of transgenic embryos through nuclear transfer using ovine fetal fibroblasts transferred with foreign genes

MA Yu-Zhen REN Yu ZHOU Xue-Yuan LIU Dong-jun XU Ri-Gan

MA Yu-Zhen, REN Yu, ZHOU Xue-Yuan, LIU Dong-jun, XU Ri-Gan. Production of transgenic embryos through nuclear transfer using ovine fetal fibroblasts transferred with foreign genes. Zoological Research, 2011, 32(6): 617-623. doi: 10.3724/SP.J.1141.2011.06617
Citation: MA Yu-Zhen, REN Yu, ZHOU Xue-Yuan, LIU Dong-jun, XU Ri-Gan. Production of transgenic embryos through nuclear transfer using ovine fetal fibroblasts transferred with foreign genes. Zoological Research, 2011, 32(6): 617-623. doi: 10.3724/SP.J.1141.2011.06617

体细胞核移植生产绵羊转hALP基因囊胚

doi: 10.3724/SP.J.1141.2011.06617
基金项目: 隙连接蛋白在绵羊胚胎发育过程中的功能研究(30660123)
详细信息
    作者简介:

    马玉珍

    通讯作者:

    马玉珍

  • 中图分类号: Q813; S826.2; Q291

Production of transgenic embryos through nuclear transfer using ovine fetal fibroblasts transferred with foreign genes

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    Author Bio:

    MA Yu-Zhen1

    Corresponding author: MA Yu-Zhen1
  • 摘要: 扩增人肝细胞再生增强因子(human augmenter of liver regeneration, ALR)基因, 利用质粒pIRES2-EGFP构建新霉素(Neo)、增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein, EGFP)双标记基因且EGFP和ALR基因为双顺反子的真核表达载体。LipofectAMINETM介导其转染体外培养的绵羊胎儿成纤维细胞(Sheep fetal fibroblast cells, sFFCs); 经G418筛选转基因细胞; 激光共聚焦显微镜挑选绿色荧光单克隆细胞。PCR、RT-PCR和免疫组织化学方法进一步检测ALR基因及其表达; 稳定表达外源基因的sFFCs作供体, 移入去核的绵羊卵母细胞中, 进行体细胞核移植。通过激光共聚焦显微镜和ALR抗体检测EGFP、ALR基因在胚胎水平上的表达,其结果表明:由IRES连接的EGFP和ALR基因可在绵羊胎儿成纤维细胞内同时表达,由此细胞核移植产生的转基因胚胎在发育的各阶段均可见绿色荧光; 囊胚中所有细胞表达EGFP基因; 发绿色荧光的胚胎中ALR基因同时存在。因此,由IRES连接标记基因和目的基因, 以标记基因指示目的基因的表达, 可简化检测目的基因的繁琐手段; 用筛选的转基因早期胚胎进行移植, 可提高制备转基因动物的效率。
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出版历程
  • 收稿日期:  2011-07-11
  • 修回日期:  2011-10-08
  • 刊出日期:  2011-12-22

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