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Improvement of Methods for Total RNA Extraction from Hepatocarcinoma Tissues and Cell Lines and Comparison of Reverse Transcription and cDNA Cloning Strategies

YI Bin CHANG Hong CAO Yi

YI Bin, CHANG Hong, CAO Yi. Improvement of Methods for Total RNA Extraction from Hepatocarcinoma Tissues and Cell Lines and Comparison of Reverse Transcription and cDNA Cloning Strategies. Zoological Research, 2009, 30(5): 520-526. doi: 10.3724/SP.J.1141.2009.05520
Citation: YI Bin, CHANG Hong, CAO Yi. Improvement of Methods for Total RNA Extraction from Hepatocarcinoma Tissues and Cell Lines and Comparison of Reverse Transcription and cDNA Cloning Strategies. Zoological Research, 2009, 30(5): 520-526. doi: 10.3724/SP.J.1141.2009.05520

肝癌组织及细胞系总RNA抽提逆转及基因克隆方法的改进与比较

doi: 10.3724/SP.J.1141.2009.05520
详细信息
    通讯作者:

    曹 毅

Improvement of Methods for Total RNA Extraction from Hepatocarcinoma Tissues and Cell Lines and Comparison of Reverse Transcription and cDNA Cloning Strategies

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    Corresponding author: CAO Yi
  • 摘要: 本文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR(q-RT-PCR)的方法。 比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(Oligo dT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶(Taq聚合酶、Pfu聚合酶、LA taq聚合酶、Prime Star聚合酶)进行长片段基因克隆的能力及效率;同时,该研究比较了不同质量总RNA对有效进行q-RT-PCR与长片段分子克隆的影响。新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高。RNA的完整性及均一性对长片段cDNA的克隆至关重要。部分降解的组织RNA及细胞RNA仅适合于q-RT-PCR检测mRNA的表达水平,而不适合于cDNA的克隆。
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出版历程
  • 收稿日期:  2009-04-30
  • 修回日期:  1900-01-01
  • 刊出日期:  2009-10-22

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