摘要:
线粒体DNA限制性片段长度多态性(RFLP)分析,已被广泛地应用于动物的系统进化和遗传多样性研究,取得了许多有意义的结果。线粒体DNA RFLP分析一般有两条途径:一是从动物组织中提取mtDNA后,酶切,紫外灯下观察,或放射性自显影。这要求所提取的mtDNA量足够多,或纯度相当高;二是将基因组DNA酶切后,用mtDNA探针进行Southern杂交。该途径不需要专门提纯mtDNA,特别适合于微量mtDNA的RFLP分析。进行Southern杂交分析,关键在于要有高质量的探针。用于制备探针的mtDNA,纯度要求较高,一般采用氯化铯密度梯度离心或制备mtDNA克隆等方法获得。这些方法,不仅操作步骤繁锁,而且设备条件要求高,在一般实验室难以实施。我们在进行鱼类mtDNA RFLP分析时,发现鱼类内脏和肌肉组织mtDNA含量较低,特别对于一些小型鱼类,能获得的mtDNA很少,无法进行足够的酶切分析,但是,从鱼类卵巢可分离制备较多的mtDNA,经进一步电泳纯化后,可制成纯度较高的地高辛标记mtDNA探针。我们建立了一种利用鲤鱼卵巢组织制备鱼类mtDNA地高辛标记探针的方法。该方法具有简便、经济、灵敏度高的特点。